液相色譜柱是高效液相色譜系統的核心部件,其性能直接影響分離效果和實驗結果的準確性。當色譜柱出現柱效下降、壓力異常升高或無法滿足分離需求時,需及時更換。以下是液相色譜柱更換的詳細流程、注意事項及維護建議。
一、更換前的準備
1. 確認新柱規格
- 核對新色譜柱的型號、填料類型(如C18、硅膠基質等)、粒徑(如5 μm、3 μm)、孔徑、pH耐受范圍及流速上限,確保與原有系統兼容。
- 檢查流動相體系是否與新柱匹配(如反相柱需避免使用強堿性流動相)。
2. 工具與材料準備
- 專用扳手(用于擰緊柱接頭)、清潔紙巾、廢液容器、適合的流動相(如甲醇、乙腈或超純水)。
- 若使用UHPLC系統,需確認新柱的壓力耐受值(通常≥100 bar)。
3. 系統狀態檢查
- 記錄當前系統的運行參數(如流速、壓力、波長等),以便更換后對比。
- 提前配制足量的新流動相,并脫氣處理。
二、停機與舊柱拆卸
1. 停機操作
- 停止泵運行,關閉檢測器(如UV燈)、自動進樣器等模塊電源,避免系統壓力突變導致液體噴濺。
- 打開排泄閥,釋放系統內殘余壓力。
2. 拆卸舊柱
- 斷開入口端接頭:用扳手逆時針擰動入口管路螺母,小心取下管路,避免液體灑出。
- 標記方向:記錄舊柱標簽上的流向箭頭(通常為“IN”和“OUT”),確保新柱安裝方向一致。
- 取出舊柱:垂直向上拔出色譜柱,避免碰撞柱管導致物理損傷。
- 清理接頭:用甲醇或異丙醇擦拭舊柱兩端的接頭,清除殘留顆粒或緩沖鹽。
三、新柱安裝與系統重啟
1. 安裝新柱
- 檢查密封墊:確認柱兩端的密封墊(如PEEK或不銹鋼材質)無破損,必要時更換。
- 對齊方向:嚴格按照“IN”端接泵、“OUT”端接檢測器的方向安裝,裝反會導致分離失效。
- 擰緊接頭:用手將管路螺母旋至接觸柱體,再用扳手輕壓至密封(通常1/4~1/2圈),避免過度用力導致柱頭損壞。
2. 系統沖洗與平衡
- 初始流速:以較低流速(如0.2~0.5 mL/min)通入新流動相,排出柱內空氣。
- 梯度平衡:若舊流動相與新柱不兼容(如從含緩沖鹽切換至純有機相),需分段過渡(如先用甲醇沖洗,再切換至目標流動相)。
- 基線穩定:持續沖洗15~30分鐘,直至檢測器基線平穩(UV噪聲<0.5 mAU),壓力值正常。
四、性能驗證與參數優化
1. 測試分離效果
- 注入標準樣品(如萘、甲苯等非保留物質或目標分析物),檢查峰形是否對稱、柱效(以塔板數衡量)是否達標。
- 對比新舊柱的保留時間、分離度及理論塔板數,確認新柱性能恢復。
2. 調整運行參數
- 根據新柱特性微調流速(如粒徑更小的填料需降低流速)、柱溫或梯度程序。
- 避免超過新柱的壓力上限(如常規C18柱壓力限制為40~60 bar)。
五、注意事項與常見故障處理
1. 關鍵操作禁忌
- 禁止反向安裝:裝反會導致固定相流失、柱壓驟升甚至堵塞。
- 避免干柱狀態:柱內無流動相時切勿運行泵,否則會損壞填料。
- 慎用強酸/堿:超出柱子pH耐受范圍(如硅膠柱pH 2~8)會加速填料溶解。
2. 典型問題排查
- 壓力異常:若新柱壓力遠高于舊柱,檢查接頭是否漏液、填料是否堵塞或流速設置過大。
- 峰形拖尾:可能因流動相未充分平衡、樣品過載或舊柱污染殘留。
- 氣泡問題:系統重啟后需排氣,可通過快速沖洗或超聲波處理消除。
六、色譜柱的日常維護
1. 使用后保養
- 實驗結束后,用純溶劑(如甲醇或乙腈)沖洗管路和柱子,防止緩沖鹽結晶堵塞。
- 長期不用時,卸下柱子并存于密閉容器中,避免填料干燥或污染。
2. 壽命延長技巧
- 控制樣品濃度和進樣量,避免超載。
- 定期再生離子交換柱或硅膠柱(如用低濃度酸/堿沖洗)。
- 存儲時注明柱子的使用歷史(如已承受的pH范圍、溶劑類型)。
七、特殊柱子的更換要點
1. 手性色譜柱:需嚴格避光保存,流動相中避免使用紫外吸收雜質。
2. 寬口徑制備柱:更換時注意接頭匹配性,流速需階梯式提升以防填料移位。
3. 親水相互作用柱(HILIC):初次使用時需長時間平衡(>1小時),流動相中需含高比例有機相。